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凝膠成像儀的樣本前處理要做好哪些呢?
點(diǎn)擊次數(shù):104 更新時(shí)間:2025-01-10
凝膠成像儀在分子生物學(xué)等諸多領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用,能清晰地呈現(xiàn)凝膠電泳后的條帶等情況,而要想獲得高質(zhì)量、準(zhǔn)確可靠的成像結(jié)果,做好樣本前處理工作至關(guān)重要,以下是要重點(diǎn)關(guān)注的幾個(gè)方面:
1.凝膠制備
要依據(jù)檢測(cè)目的和樣本特性來(lái)選擇合適的凝膠類(lèi)型,常見(jiàn)的有瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠等。如果是對(duì)DNA進(jìn)行分離檢測(cè),瓊脂糖凝膠通常是不錯(cuò)的選擇,其制備時(shí)需要準(zhǔn)確稱(chēng)量瓊脂糖粉末,按照合適的比例加入到緩沖液中,然后加熱使其充分溶解,待冷卻至適宜溫度后倒入制膠模具中,要確保凝膠均勻平整,避免出現(xiàn)氣泡、裂縫等情況,因?yàn)檫@些瑕疵可能會(huì)干擾后續(xù)成像時(shí)對(duì)條帶的觀察和分析。對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠,其配制過(guò)程更為精細(xì)復(fù)雜,要嚴(yán)格把控各試劑的用量、混合順序以及聚合反應(yīng)的條件,保證凝膠的質(zhì)量符合要求,為樣本的分離和成像奠定良好基礎(chǔ)。
2.樣本加載
樣本加載同樣關(guān)鍵,在吸取待檢測(cè)樣本時(shí),要使用合適的移液器,確保吸取的體積準(zhǔn)確無(wú)誤,避免因加樣量過(guò)多或過(guò)少影響成像效果。比如在進(jìn)行DNA電泳時(shí),加樣量過(guò)多可能導(dǎo)致條帶過(guò)寬、模糊,甚至出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象;加樣量過(guò)少則條帶可能太淡,不易觀察清楚。同時(shí),加樣時(shí)要小心操作,將樣本緩慢、準(zhǔn)確地加到凝膠的加樣孔中,防止樣本溢出到相鄰孔或者凝膠表面,破壞樣本的分布秩序,影響后續(xù)條帶的清晰呈現(xiàn)。
3.電泳條件設(shè)定
電泳過(guò)程是實(shí)現(xiàn)樣本在凝膠中有效分離的重要步驟,需要合理設(shè)定電泳條件。要根據(jù)樣本的大小、電荷等性質(zhì)來(lái)確定合適的電壓、電流以及電泳時(shí)間。電壓過(guò)高可能使樣本在凝膠中遷移速度過(guò)快,導(dǎo)致條帶分離不清晰,出現(xiàn)彌散現(xiàn)象;電壓過(guò)低則樣本遷移過(guò)慢,會(huì)延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間,甚至無(wú)法達(dá)到理想的分離效果。而且電泳時(shí)間也需精準(zhǔn)把控,過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短都不利于樣本的準(zhǔn)確分離,進(jìn)而影響最終凝膠成像儀上呈現(xiàn)的圖像質(zhì)量。
4.凝膠染色與脫色
為了讓樣本條帶能夠在凝膠成像儀下清晰可見(jiàn),往往需要對(duì)凝膠進(jìn)行染色與脫色處理。像對(duì)DNA凝膠常用的溴化乙錠染色法,要按照規(guī)定的濃度和時(shí)間進(jìn)行染色操作,之后進(jìn)行充分的脫色,去除多余的染色劑,使條帶的顏色對(duì)比更鮮明,背景更干凈,便于凝膠成像儀準(zhǔn)確捕捉和清晰呈現(xiàn)樣本的電泳結(jié)果,幫助研究人員更好地進(jìn)行后續(xù)的分析與判斷。